RNEEC/HL-036 大鼠正常子宫内膜细胞：特性、培养与科研应用

一、细胞基本特性与来源

二、细胞培养关键技术

1. 培养基优化
   • 基础配方：推荐使用子宫内膜细胞专用培养基（如 EMEM 或 DMEM/F12），添加 10% 胎牛血清（FBS）、10 ng/mL 表皮生长因子（EGF）、1 μg/mL 胰岛素、100 nM 孕酮及双抗（青霉素 100 U/mL + 链霉素 100 μg/mL）。
   • 激素调控：因子宫内膜细胞对性激素敏感，研究激素相关机制时需使用无血清培养基（如 SFM），并额外添加 10 nM 雌二醇（E₂）和 1 μM 孕酮（P₄）模拟体内周期环境。
2. 培养环境与传代
   • 条件控制：37℃、5% CO₂恒温培养箱，湿度≥90%；培养基 pH 值需维持在 7.2~7.4，避免过酸或过碱影响细胞增殖。
   • 传代策略：当细胞融合度达 80%~90% 时，用 0.25% 胰酶 - EDTA 消化 1~2 分钟，以 1:2~1:3 比例传代；消化时需密切观察，避免过度消化导致细胞成团或损伤细胞膜表面激素受体。
3. 冻存与复苏
   • 冻存液配方：90% FBS + 10% DMSO，按 5×10⁵~1×10⁶ cells/mL 密度分装，经程序降温盒（-80℃过夜）后转入液氮保存，复苏存活率可达 85% 以上。
   • 质量控制：每批次细胞需通过支原体检测（如 PCR 法）、活细胞计数（台盼蓝染色）及标志物表达验证，确保无交叉污染且表型稳定。

三、科研应用场景与案例

1. 生殖生理与胚胎着床研究
   RNEEC/HL-036 可模拟子宫内膜 “容受性” 窗口期，用于研究胚胎着床的分子机制。例如：
   • 通过共培养模型探究滋养层细胞（如 JEG-3）与子宫内膜细胞的黏附分子（如 L-selectin、整合素 αvβ3）相互作用；
   • 利用转录组测序分析雌激素诱导的子宫内膜细胞分泌因子（如白血病抑制因子 LIF）变化，揭示着床失败的潜在靶点。
     案例：某团队通过该细胞系发现，孕激素预处理可上调子宫内膜细胞 HOXA10 基因表达，增强其对胚胎的黏附能力，为临床辅助生殖技术中激素用药提供了理论依据。
2. 子宫内膜疾病机制研究
   • 子宫内膜异位症：与异位内膜细胞系（如 12Z）对比，分析正常与异位细胞的差异表达基因（如 MMPs、VEGF），探讨异位病灶形成的关键信号通路（如 Wnt/β-catenin）；
   • 子宫内膜增生 / 癌变：通过致癌物（如雌二醇衍生物）处理，诱导细胞异常增殖，结合免疫印迹检测 p53、PI3K/AKT 等通路变化，构建癌前病变体外模型。
     案例：在子宫内膜炎研究中，利用脂多糖（LPS）刺激 RNEEC/HL-036，发现 TLR4/MyD88 通路激活可诱导 IL-6、TNF-α 等促炎因子分泌，为抗生素联合**治疗提供了靶点。
3. 药物筛选与毒性评估
   • 激素类药物：测试新型孕激素受体调节剂（如 Ulipristal）对子宫内膜细胞增殖的抑制作用，通过 EdU 染色或 CCK-8 法评估药物效力；
   • 生殖毒性化合物：检测环境雌激素（如双酚 A）对子宫内膜细胞激素受体表达的干扰，利用 ELISA 法分析雌激素应答基因（如 PS2、CYP19A1）的异常激活。

四、局限性与实验注意事项

1. 种属与个体差异：大鼠子宫内膜的激素响应模式与人存在差异（如大鼠动情周期为 4~5 天，人类为 28 天），涉及临床转化时需结合原代人子宫内膜细胞（hEMs）或动物模型（如大鼠异位移植模型）验证。
2. 激素微环境模拟：体外培养难以完全重现体内复杂的激素网络（如黄体生成素、前列腺素），建议采用三维培养（如 Matrigel 基质胶）或与成纤维细胞共培养，提升模型生理相关性。
3. 实验设计要点：研究周期依赖性基因时，需同步化细胞周期（如血清饥饿法）；检测分泌蛋白时，需使用无血清培养基孵育以排除血清干扰。

五、总结