AML-12 小鼠正常肝细胞：特性、应用与研究价值

一、细胞特性与生物学背景

1. 起源与永生化
   AML-12 细胞来源于 C57BL/6J 小鼠的正常肝细胞，通过转染 SV40 病毒大 T 抗原实现永生化，保留了肝细胞的典型形态和功能特征，如上皮样贴壁生长、多边形细胞形态及清晰的细胞间连接。
2. 功能特征
   • 代谢能力：表达多种肝脏特异性酶，如细胞色素 P450 家族（CYP1A2、CYP2B10、CYP3A11 等）、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶（UGT）和谷胱甘肽 S - 转移酶（GST），可模拟肝细胞的药物代谢和**功能。
   • 合成能力：能合成白蛋白（Albumin）、转铁蛋白（Transferrin）等肝脏特异性蛋白，维持正常肝细胞的分泌功能。
   • 信号通路：保留肝细胞膜表面受体（如胰岛素受体、低密度脂蛋白受体）及相关信号通路，适用于代谢调控机制研究。
3. 核型与稳定性
   该细胞系核型接近正常小鼠肝细胞（2n=40），在常规培养条件下可稳定传代 50 代以上，且功能特性无显著衰减，适合长期实验需求。

二、培养条件与操作要点

1. 培养基组成
   推荐使用 DMEM 高糖培养基（含 4.5 g/L 葡萄糖），添加 10% 胎牛血清（FBS）、1% 非必需氨基酸（NEAA）、1 mM 丙酮酸钠、100 U/mL 青霉素 - 链霉素，及关键生长因子组合（5 μg/L 胰岛素、5.5 μg/L 转铁蛋白、5 ng/L 硒酸钠，即 ITS-G）。
2. 培养环境
   需在 37℃、5% CO₂的湿润培养箱中孵育，贴壁密度达 80%~90% 时进行传代，消化液推荐使用 0.25% 胰酶 - EDTA，消化时间控制在 2~3 分钟，避免过度消化损伤细胞。
3. 质量控制
   • 支原体检测：定期通过 PCR 或荧光染色法检测，确保无支原体污染。
   • 功能验证：可通过检测白蛋白分泌水平或 CYP 酶活性，验证细胞功能完整性。

三、应用场景与研究进展

1. 肝脏疾病建模
   • 非酒精性脂肪肝（NAFLD）：通过高脂培养基或棕榈酸诱导脂质堆积，模拟肝细胞脂肪变性，研究 PPARγ、AMPK 等信号通路在脂肪代谢中的作用。
   • 肝损伤与修复：利用 CCl₄、APAP（对乙酰氨基酚）等肝毒素诱导氧化应激模型，探讨 Nrf2、NF-κB 等通路在肝损伤中的调控机制。
2. 药物代谢与毒性评估
   • 代谢酶诱导 / 抑制：通过检测 CYP 酶活性变化，评估药物（如利福平、酮康唑）对肝脏代谢功能的影响，助力药物相互作用研究。
   • 肝毒性筛选：对比 AML-12 细胞与肝癌细胞系（如 HepG2）的毒性反应，筛选潜在肝毒性化合物，降低临床前研究风险。
3. 代谢调控机制研究
   • 糖脂代谢：通过胰岛素刺激实验，研究 PI3K/Akt 通路对葡萄糖摄取和糖原合成的调控，或通过油酸处理探讨脂质合成与 β- 氧化的平衡。
   • 胆汁酸代谢：利用法尼醇 X 受体（FXR）激动剂 / 拮抗剂，分析胆汁酸合成关键酶（如 CYP7A1）的表达变化。
4. 新型疗法开发
   • 基因编辑：通过 CRISPR-Cas9 系统敲除 / 过表达特定基因（如 PNPLA3、TM6SF2），研究遗传性肝病的发病机制。
   • 纳米药物递送：利用 AML-12 细胞评估肝靶向纳米载体的摄取效率及毒性，优化药物递送系统设计。

四、局限性与替代模型