描述
Description
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NK-92®MI是天然杀伤细胞,对多种恶性细胞具有细胞毒性;在铬释放试验中,它同时杀死K562细胞和Daudi细胞
。该细胞系来源于一位患有快速进展的非霍奇金淋巴瘤的50岁白人男性的外周血单个核细胞。在免疫学和癌症研
究中使用这种细胞系。NK-92MI是转染得到的源自NK-92的IL-2非依赖的NK细胞株。亲本细胞通过微粒体基因转化
法用逆转录病毒MFG-hIL-2载体携带的人IL-2 cDNA进行转化。可能由于载体整合到基因组DNA中,转化是稳定的。
这株细胞对很多恶性细胞有细胞毒性;铬释放试验显示它能杀死K562和Daudi细胞。NK-92细胞有以下特征: CD2,
CD7, CD11a, CD28, CD45, CD54, CD56表面标记阳性;CD1, CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19,
CD20, CD23, CD34和HLA-DR表面标记阴性。NK-92MI 和 NK-92CI这两个变种都包含、表达并合成hIL-2 cDNA。NK-92MI细胞合成的IL-2水平比NK-92CI高,而亲本细胞不合成表达。
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培养基和添加剂
Complete Growth Medium and Culture Conditions
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气相:空气,95%;二氧化碳,5%。
温度:37摄氏度。
培养参考:传代比例1:2,传代周期4-5天
冻存液配方:完全培养液92%,DMSO 8%
细胞运输方式:活细胞可保温运输或干冰冻存管。
注意事项:
(1)细胞除首//次传代需离心收集细胞,后续细胞换液或传代时建议使用半换液法,即换液或传代时待细胞自然沉降后,弃
去一半旧培养液,之后可直接向培养瓶中添加等体积的新鲜培养液,然后将细胞吹打均匀或移入两个新的T25 培养瓶中(
1:2传代),补充新的完全培养基至8-10ml/瓶即可。
(2)细胞生长状态呈现细胞聚团生长。细胞在培养过增殖细胞碎片多、颗粒多是正常现象。当细胞密度较大或者培养液变
黄时,需要及时进行半换液或者完全换液。在换液过程中尽量冲散细胞。
(3)NK-92MI细胞较难复苏,复苏初期细胞生长缓慢(一周左右),会有部分细胞破碎,会出现大量死细胞和死细胞碎片,
培养两周后有所好转。建议每1-2周对细胞进行1000rpm,离心5 min,弃掉上清,加入新鲜完全培养液,可以去掉部分细胞
碎片和颗粒。培养过程中会出现死细胞和细胞碎片,收到邮寄的活细胞的用户若发现培养物内有部分死细胞和细胞碎片,此
为正常现象。细胞碎片不影响细胞正常生长,中间可换液一次。待细胞恢复正常生长速度后可进行传代培养(半换液法)。由
于此细胞复苏周期长生长慢,建议高密度细胞冻存(T25培养瓶1瓶约含106 细胞量建议冻存1支)
(4)请注意保持细胞密度在合适的范围(3x105 ~ 3x106 /ml),不能过稀。
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