CHO/dhFr-中国仓鼠卵巢细胞-二氢叶酸还原酶缺陷型
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CHO/dhFr - 中国仓鼠卵巢细胞-二氢叶酸还原酶缺陷型简介
CHO/dhFr - 细胞是中国仓鼠卵巢细胞(CHO)的特殊突变株,因缺乏二氢叶酸还原酶(DHFR)活性而得名。DHFR 是叶酸代谢途径中的关键酶,参与四氢叶酸的合成,而该细胞系由于 DHFR 基因缺陷,无法在不含次黄嘌呤和胸腺嘧啶的培养基中存活,这一特性使其成为基因工程和生物制药领域的重要工具。
从生物学特性来看,CHO/dhFr - 细胞保留了 CHO 细胞的基本形态与生长特征,呈上皮样贴壁生长,细胞形态多为多边形或不规则形。在适宜条件下,细胞增殖能力较强,倍增时间约为 18 - 24 小时,可稳定传代,适合大规模培养。与野生型 CHO 细胞相比,其*显著的差异在于 DHFR 缺陷,这一特性使得该细胞在筛选和扩增外源基因时具有独特优势。
在培养和基因工程操作方面,CHO/dhFr - 细胞需要在添加了次黄嘌呤和胸腺嘧啶(HT)的培养基中才能正常生长。当利用该细胞进行基因表达研究时,通常将编码 DHFR 的基因与目的基因共同构建到表达载体中,转入细胞后,将细胞置于不含 HT 但含有甲氨蝶呤(MTX)的培养基中筛选。MTX 是 DHFR 的强抑制剂,普通细胞会因 MTX 抑制 DHFR 活性而死亡,而成功转入 DHFR 基因和目的基因的细胞则能够在这种培养基中存活并大量增殖,从而实现对目的基因阳性克隆的高效筛选。同时,逐步提高 MTX 浓度,可促使细胞内整合的表达载体拷贝数增加,进而显著提高目的蛋白的表达水平。
在应用领域,CHO/dhFr - 细胞发挥着重要作用。在生物制药行业,它是生产重组蛋白药物的理想宿主细胞。全球众多上市的治疗性单克隆抗体、细胞因子、生长激素等生物药均采用该细胞系生产,如治疗类风湿关节炎的阿达木单抗等。由于其能够对表达的蛋白进行正确的折叠、糖基化等翻译后修饰,生产出的重组蛋白药物具有与天然蛋白相似的结构和功能,且**性高、免疫原性低。此外,在基础科研中,CHO/dhFr - 细胞也常用于研究基因表达调控机制、蛋白质功能及细胞信号通路等,为生命科学领域的探索提供了重要的细胞模型。