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人早幼粒急性白血病|人早幼粒急性白血病细胞 atcc细胞

  人早幼粒急性白血病细胞

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  人早幼粒急性白血病细胞 运输和保存:可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式:(1)干冰运输,收到后立即转入液氮冻存或直接复苏;(2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

  人早幼粒急性白血病细胞|细胞培养步骤:

  一.培养基及培养冻存条件准备:

  1) 准备DMEM培养基(DMEM/F-12,GIBCO,货号12400024,添加NaHCO3 2.0g/L),85%;马血清,10%;胎牛血清,5%。

  2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。

  3) 冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。

  二. 细胞处理:

  1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养隔夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养隔夜)。**天换液并检查人早幼粒急性白血病细胞密度。

  2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

  对于人早幼粒急性白血病细胞|贴壁细胞,传代可参考以下方法:

  1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

  2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若人早幼粒急性白血病细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

  3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。

  4. 将人早幼粒急性白血病细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

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