●半定量●:是将各样品目的蛋白量分别除以其内参含量,得到的数值即为内参校正后的各样品中目的蛋白相对含量,再用此数值进行样品间的比较和分析,得到目的蛋白含量在不同样品间的实际变化结果,是一个比值差异的统计学分析。 ●内部参照●:内参即是内部参照(Internal Control),对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins),它们在各组织和细胞中的表达相对恒定,在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物,借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差,这样半定量的结果才更为可信。
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●稳定转染●:即进入细胞的质粒整合入细胞基因组中,并能随细胞分裂稳定传递下去。这是相对瞬时转染而言的。 瞬时转染的表达时间短暂,外源基因导入整合基因组的几率非常低,绝大部分以游离形式存在,不能随细胞分裂而一同复制,导致后拷贝数被稀释,无法达到持续表达外源基因的目的。一般用转染试剂进行质粒转染,多为瞬时转染。 ●一般如下情况需要构建稳定株●: 1. 长期在目的细胞中研究基因功能,通过构建稳定株,可以大大降低频繁转染或者病毒包装的成本,也极大方便实验研究; 2. 部分蛋白半衰期极长,瞬时 RNA 只能干扰表达,无法去除已经表达的目的蛋白,通过构建稳定株可以实现更好的基因干扰效果; 3. 瞬转往往会引入极高拷贝数的表达,导致因为人为因素造成实验结果的不**,构建稳定株可以帮助筛选拷贝数适量的细胞进行实验研究; 4. 需要用诱导表达系统的,主要是一些致死基因或者是需要时空表达的; 5. 需要用细胞做动物实验的,比如裸鼠成瘤等,往往需要构建成稳转株。
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编辑:小檀20181031
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