核因子的激活T细胞亚型c4ELISA试剂盒 严格质控
● 试剂盒操作步骤如下: ●
1.用TBS或PBS制备蛋白样品的稀释液。稀释度要取决于样品中存在的抗原浓度。由于抗原浓度通常未知,因此有必要检测宽范围的稀释度。
2.制备硝酸纤维素膜,用铅笔标上每个待测一抗/二抗的浓度。所需转印膜的数量取决于待筛查的一抗和/或二抗有多少种不同的稀释浓度。通常来说,一抗要检测一到两个稀释度,而二抗要检测两到三个稀释度。
3.将硝酸纤维素膜放在滤纸上,将抗原稀释液点在膜上。每个点的体积越少越好(1-5μl),以保证点尽可能地小。如果需要使用5μl以上的样品,在点完一次后,干燥2-5分钟,再点一次。让膜干燥10-15分钟,或直至无可见水分。
4.用封闭液封闭膜上的非特异性位点,室温震荡孵育1h。
5.用包含1/10体积封闭液的洗涤液稀释一抗,并加到膜上,室温震荡孵育1h。
6.用洗涤液洗膜4次,每次5分钟,用尽可能大体积的洗脱液。
7.用包含1/10体积封闭液的洗涤液稀释二抗,并加到膜上,室温震荡孵育1h。
8.用洗涤液洗膜4次,每次5分钟,用尽可能大体积的洗脱液。
9.准备底物工作液。白介素1ELISA试剂盒厂家制备足够体积的工作液,以确保印迹点完全湿润,且印迹点在孵育过程中不会干。
10.将膜放在底物工作液中孵育5分钟。
11.将膜取出,放在塑料布或其它防护膜上。
12.蛋白一侧朝上,将印迹贴到胶片上,曝光30-60秒。为获得*结果,曝光时间可能不同。如果*次曝光不够,再试试2-5分钟。
13.在一张优化好的印迹膜上,底物产生的信号可能会持续6-24小时,这取决于具体的产品。
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酶联免疫检测法检测原理以及本方法的优点?
● 原理:酶联免疫吸附试验法的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。
在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。
再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
● 优点:具有很高的特异性;另一方面由于酶标记抗原或抗体是酶分子与抗原或抗体分子的结合物,它可以催化底物分子发生反应,产生放大作用,正因为此种放大作用而使本法具有很高的敏感性;ELISA法还具有简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点,且适用于大批量标本的检测。
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编辑:小檀20180925