CD143[血管紧张素转化酶]ELISA试剂盒 标准品

● 试剂盒操作步骤如下： ● 1.用TBS或PBS制备蛋白样品的稀释液。稀释度要取决于样品中存在的抗原浓度。由于抗原浓度通常未知，因此有必要检测宽范围的稀释度。 2.制备硝酸纤维素膜，用铅笔标上每个待测一抗/二抗的浓度。所需转印膜的数量取决于待筛查的一抗和/或二抗有多少种不同的稀释浓度。通常来说，一抗要检测一到两个稀释度，而二抗要检测两到三个稀释度。 3.将硝酸纤维素膜放在滤纸上,将抗原稀释液点在膜上。每个点的体积越少越好(1-5μl)，以保证点尽可能地小。如果需要使用5μl以上的样品，在点完一次后,干燥2-5分钟,再点一次。让膜干燥10-15分钟，或直至无可见水分。 4.用封闭液封闭膜上的非特异性位点，室温震荡孵育1h。 5.用包含1/10体积封闭液的洗涤液稀释一抗，并加到膜上，室温震荡孵育1h。 6.用洗涤液洗膜4次，每次5分钟，用尽可能大体积的洗脱液。 7.用包含1/10体积封闭液的洗涤液稀释二抗，并加到膜上，室温震荡孵育1h。 8.用洗涤液洗膜4次，每次5分钟，用尽可能大体积的洗脱液。 9.准备底物工作液。白介素1ELISA试剂盒厂家制备足够体积的工作液,以确保印迹点完全湿润,且印迹点在孵育过程中不会干。 10.将膜放在底物工作液中孵育5分钟。 11.将膜取出,放在塑料布或其它防护膜上。 12.蛋白一侧朝上,将印迹贴到胶片上,曝光30-60秒。为获得*结果,曝光时间可能不同。如果*次曝光不够,再试试2-5分钟。 13.在一张优化好的印迹膜上,底物产生的信号可能会持续6-24小时,这取决于具体的产品。

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●使用 RIPA 提取的总蛋白总结●： 1. 并非是真正意义上的总蛋白，相当一部分蛋白丢失在弃去的不可溶组分中。 2. 很多常用的内参，如 Actin，tubulin，LaminA，H3 等均在 RIPA 不可溶组分中被丢失。 3. 目标蛋白可能会在 RIPA 不可溶组分中被丢失，也可能不被丢失，具有不可预见性，非选择性。 4. 同种蛋白在不同样品中丢失的情况并不相同，蛋白丢失并不成比例。 5. 利用目的蛋白和内参比值做校正会出现偏差，不适合 WB 目的蛋白的半定量分析。

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编辑：小檀20180918