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●使用 RIPA 提取的总蛋白总结●: 1. 并非是真正意义上的总蛋白,相当一部分蛋白丢失在弃去的不可溶组分中。 2. 很多常用的内参,如 Actin,tubulin,LaminA,H3 等均在 RIPA 不可溶组分中被丢失。 3. 目标蛋白可能会在 RIPA 不可溶组分中被丢失,也可能不被丢失,具有不可预见性,非选择性。 4. 同种蛋白在不同样品中丢失的情况并不相同,蛋白丢失并不成比例。 5. 利用目的蛋白和内参比值做校正会出现偏差,不适合 WB 目的蛋白的半定量分析。

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作为一种生物产品,抗体的效果很容易随批次而变化。可信度较高的抗体供应商现在通常会向科研人员提供数据,来介绍他们目录中的每一种抗体是如何被验证的。有自主测试能力的实验室也可以自行检验他们所订购的抗体。在实验中计划使用的特定实验流程也是采购中应该考虑的因素。没有报告抗体来源和货号的论文其实很难重复。为了获得大的可靠性,研究人员应该尝试用同一批次的抗体进行一系列的实验。

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编辑:小檀20180907